无锡安锐欣管道科技有限公司提供---支原体pcr检测试剂盒代理。
---支原体pcr检测试剂盒是即用型pcr试剂盒的改良产品, 含有taq dna 聚合酶、dntps、mgcl2、反应缓冲液、pcr 增强剂、上样染料等所有pcr 所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行pcr 反应,具有广泛的用途。
反应五要素:
参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2
引物:引物是pcr特y性反应的关键,pcr 产物的特y性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板dna序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
1、引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
2、引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
3、引物碱基:g c含量以40-60%为宜,g c太少扩增效果不佳,g c过多易出现非特异条带。atgc随机分布,避免5个以上的嘌呤或pyrimidine nucleoside酸的成串排列。
4、避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,是3端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
5、引物3端的碱基,是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。
6、引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子clone很有好处。
7、引物的特y性:引物应与nucleic acid序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特y性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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